神経科学における多光子顕微鏡
フェムト秒ファイバーレーザーで顕微鏡をシンプルに
二光子蛍光顕微鏡は、生体組織をミクロン単位のスケールで三次元かつ非侵襲で観察できる、バイオイメージングにおいて重要な技術です。従来の線形蛍光顕微鏡とは異なり、非線形特性と長波長励起によって、より深い組織までの観察が可能となり、光毒性が低減されます。
これらの利点により、非線形蛍光顕微鏡は、生体内のニューロンやその活動を直接的かつ時空間的に可視化するのに適した選択肢となります。このような実験で使用される主要な蛍光タンパク質としては、緑色蛍光タンパク質(GFP)と赤色蛍光タンパク質(RFP)があり、それぞれ 920 nm および 1050 nm の二光子吸収によって励起されます。
近年、780 nm、920 nm、1050 nm の波長で発振する固定波長・モード同期フェムト秒ファイバーレーザーへの急速な移行が進んでいます。これらのレーザーシステムは、二光子顕微鏡用途、特に神経科学分野において、コスト効率が高く、使いやすい代替手段となっています。
トプティカ社が提供できること
TOPTICA のフェムト秒ファイバーレーザーは、優れた性能と使いやすさを兼ね備えています。特に神経科学分野のアプリケーションにおいて、FemtoFiber ultraは、緑色蛍光タンパク質(GFP)や赤色蛍光タンパク質(RFP)のイメージングを通じて生物学的課題に対応するのに理想的であり、非線形顕微鏡に広く採用されています。
最適な画像品質を実現するために、TOPTICA の FemtoFiber ultraにはClean Pulse Technologyが搭載されており、時間的パルスプロファイルにおけるペデスタルやサイドウィングを低減します。これにより、レーザーの全出力が二光子励起に寄与し、Clean Pulse Technologyによって蛍光画像の明るさとコントラストが最大化されるとともに、サンプルへの熱的影響を最小限に抑えることができます。
また、TOPTICA の FemtoFiber ultra は、科学者にとって優れた使い勝手を提供します。レーザーにはビームコンディショニング機能が備わっており、入力レーザービームのパラメータを顕微鏡に適応させることが可能です。まず群遅延分散(GDD)事前補償をソフトウェア制御することで、蛍光シグナル強度の最適化が容易になります。第二に音響光学変調器(AOM)が搭載されており、ビームスキャナーと同期した高速パワーモジュレーションやフライバックブランキングが可能となり、サンプルへの損傷やフォトブリーチングを最小限に抑えることができます。そしてレーザーは非常にコンパクトでパッシブ冷却型のパッケージで提供され、運用・保守コストを大幅に削減できます。
さらに、FemtoFiber ultra 920 及び1050 はファイバー出力、femtosecond fiber delivery に対応できるようになりました。これにより、最新の顕微鏡システムへの統合の新たな可能性が開かれます。レーザーと顕微鏡間の煩雑な光学調整を不要にし、光学テーブル上の光学系をシンプルな FC/APC ファイバー接続に置き換えることで、使いやすさがさらに向上しながら、高性能を維持し、最良の蛍光画像品質を確保します。